Научно-издательский центр «Открытие» otkritieinfo ru Современная биология: вопросы и ответы




старонка5/11
Дата канвертавання24.04.2016
Памер1.98 Mb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КАНДИДОЗА У ЖЕНЩИН ПРИ ПРЕДГРАВИДАРНОЙ ПОДГОТОВКЕ

А.П. Годовалов1,2, Л.П. Быкова1, Т.Ю. Даниелян3

1ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития, Пермь, Россия, AGodovalov@gmail.com

2ФКУЗ Медико-сантарная часть МВД России по Пермскому краю, Пермь, Россия

3ООО «Медицинская студия», Пермь, Россия, perm-med@mail.ru
Введение. Известно, что во время репродуктивного периода часто встречается инфицирование полового тракта женщин, что отражается на фертильности и течение беременности [1]. Среди инфекционных заболеваний чаще выявляется вульвовагинальный кандидоз [4]. У женщин в 75% случаев регистрируется хотя бы один случай кандидозного инфицирования, а у 5-8% - повторного инфицирования [4]. Установлено, что при наличии Candida в цервикальном канале беременность наступает в 19,5% случаев, а спонтанные выкидыши – в 46,7% случаев [5]. Однако, отмечается недостаток информации о грибковых поражениях у женщин при планировании беременности, а также нерегулярность самих исследований. В связи с этим целью работы явилась оценка клинико-микробиологических характеристик кандидоза у женщин на этапе предгравидарной подготовки.

Материалы и методы. Проведено клиническое (гинекологическое) и микробиологическое обследование 285 женщин на этапе предгравидарной подготовки. Первую группу составили пациентки, у которых кроме кандидоза обнаружены возбудители инфекций, передающихся половым путем. Вторую группу составили пациентки с кандидозной моноинфекцией.

Результаты исследования. У пациенток первой группы аднексит встречался в 82% случаев (в второй – в 78%), цервицит – в 59% (в второй – в 50%), кольпит – в 40% (в второй – в 22%), эндометрит – в 73% (в второй – в 72%). Невынашивание беременности наблюдалось только у пациенток первой группы (9% случаев). Частота бесплодия была одинаковой в обеих группах.

При обследовании женщин грибки рода Candida были обнаружены в 14% случаев. Представители рода Candida в 90% случаев были представлены C. albicans, в 2,5% - C. tropicalis, в 7,5% - C. kefyr. В монокультуре грибки обнаружены у 5 обследованных (12,5%). Наибольшей обсемененность генитального тракта была у пациенток первой группы, у них Candida в количестве 105 КОЕ/мл и более обнаружены в 85% случаев, а у пациенток второй группы – в 78% случаев.

Исследования других возбудителей инфекций, передающихся половым путем, показали, что у пациенток первой группы были обнаружены хламидии в 31% случаев, микоплазмы в 45,5%, уреаплазмы в 54,5%, вирус папилломы человека в 18%, гарднереллы в 9%, цитомегаловирус в 4,5% и вирус простого герпеса в 4,5%.

При анализе состава кандида-бактериальных ассоциаций: в 37% случаев обнаружена E. coli, в 20% - St. aureus, в 11% - условно-патогенные энтеробактерии (кроме E. coli), в 14% - коагулазаотрицательные стафилококки, в 43% - коагулазапозитивные стафилококки, в 6% - нейссерии (кроме N. gonorrhoeae).

Наряду с определением микробного пейзажа интерес представляет определение чувствительности к антимикробным препаратам. Установлено, что штаммы Candida были устойчивы к кетоконазолу в 55% случаев, к итраконазолу – в 50%, к амфотерицину В – в 35%, к флуконазолу – в 35%, к котримазолу – в 27,5% и к нистатину – в 20% случаев. К 1-3 препаратам було устойчиво 52,5% штаммов Candida, а к 4-6 – 20%. Штаммы, чувствительные ко всем 6 препаратам, выявлены в 27,5% случаев.

Обсуждение. Проведенные исследования показали, что у женщин на этапе предгравидарной подготовки в значительном количестве случаев выявлены грибы рода Candida, которые могут значительно снижать частоту имплантации плодного яйца [5]. При отягощенном гинекологическом анамнезе с инфекциями, передающимися половым путем, Candida выявляются чаще и в значительном количестве. В микробном пейзаже при урогенитальном кандидозе наблюдается большая доля участия E. coli и St. aureus. Подобный факт является крайне неблагоприятным, т.к. показано, что некоторые бактерии продуцируют канцерогены, а продукты бактерий семейства Enterobacteriaceae могут рассматриваться как инициаторы канцерогенеза в эндометрии [3]. Отмечен рост устойчивости Candida к флюконазолу. По данным Czaika et al. [2], лечение флуконазолом в дозах менее 800 мг/сут не превышает барьера адаптации для С. glabrata, а при стандартных дозах препарата устойчивость нарастает в ходе лечения.

Заключение. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о необходимости регулярного и тщательного микробиологического обследования женщин при предгравидарной подготовке.
Литература

1. Arsic-Arsenijevic V., Radonjic I., Mijac V., Cirkovic I. Importance of microbiologic examination of vaginal secretions in the reproductive period // Srp. Arh. Celok. Lek. – 2004. – Vol. 132, №1-2. – P. 44-49.

2. Czaika V., Tietz H.J., Schmalreck A. et al. Antifungal susceptibility testing in chronically recurrent vaginal candidosis as basis for effective therapy // Mycoses. – 2000. – Vol. 43, Suppl. 2. – P. 45-50.

3. Mikamo H., Izumi K., Ito K. et al. Endometrial bacterial flora detected in patients with uterine endometrial cancer // Kansenshogaku Zasshi. – 1993. – Vol. 67, №8. – P. 712-717.

4. Vermitsky J.P., Self M.J., Chadwick S.G. et al. Survey of vaginal flora Candida species isolates from women of different age groups by use of species-specific PCR detection // J. Clin. Microbiol. – 2008. – Vol. 46, №4. – P. 1501-1503.

5. Wittemer C., Bettahar-Lebugle K., Ohl J. et al. Abnormal bacterial colonisation of the vagina and implantation during assisted reproduction // Gynecol. Obstet. Fertil. – 2004. – Vol. 32, №2. – P. 135-139.




ЭНТЕРОБОКТЕРИИ

НАЗЕМНЫХ ЭКОСИСТЕМ ЯКУТИИ

Л. А. Ерофеевская

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения РАН,

г. Якутск, Россия, E-mail: lora-07.65@mail.ru
В настоящее время, актуальными стали исследования посвящённые проблемам, антропогенного и техногенного воздействия на наземные экосистемы. Эти исследования представляют большой научный и практический интерес ещё и потому, что за последнее десятилетие клиника и эпидемиология некоторых заболеваний изменилась больше, чем за всю историю наблюдения болезней, в том числе и заразных [1].

В связи с неудовлетворительным санитарно-техническим состоянием канализационных сетей, недостаточным количеством автотранспорта для вывоза жидких бытовых отходов большинство территорий населённых пунктов Якутии продолжают обширно загрязняться хозяйственно-бытовыми сточными водами, что в значительной степени обусловливает циркуляцию в окружающей среде энтеробактерий и кишечных вирусов.

Например, в условиях многофакторного антропогенного загрязнения окружающей среды на территории северного мегаполиса диагностирован факт обсеменённости снежного покрова потенциально-патогенными микроорганизмами, в том числе энтеробактериями. Доминирующими видами в испытуемых образцах снежного покрова селитебной зоны г. Якутска и пригорода явились энтеробактерии рода Klebsiella (40,6%) [2].

Анализ циркуляции выделенных микроорганизмов в городской экосистеме подтвердил тесную взаимосвязь макро и микроорганизмов. Из числа положительных находок на представителей рода Klebsiella при исследованиях пищевых продуктов пришлось 48,0 %; воды - 35 ,1 %; смывов с объектов окружающей среды - 48,2%. При расшифровке гастроэнтероколитов этот показатель составил 40%. На развитие дисбактериозов Klebsiella повлияла в 13% случаев. Клебсиеллёз органов дыхания составил 5 % от всей выделенной микрофлоры.

Проанализирована лекарственная устойчивость клебсиелл к антибиотическим препаратам у 49 больных. У всех пациентов выделенные штаммы бактерий имели резистентность одновременно к двум, трём, четырём и более антибактериальным препаратам. При анализе структуры лекарственно устойчивых клебсиелл по отдельным препаратам отмечена 100% устойчивость к тетрациклину, фуразолидону, клиндамицину, полимиксину, фурадонину, амикацину, карбециллину, что служит показателем эволюционной изменчивости энтеробактерий под влиянием факторов окружающей среды [3].

К сожалению, существующая система микробиологического мониторинга природной среды слабо увязана с наблюдением за циркуляцией микроорганизмов и заболеваемостью населения [4]. Изученность же данной проблемы в Якутии остаётся такой, что большей частью не даёт оснований указывать на наличие прямой причинной связи состояния здоровья населения с нарушением экологического равновесия.

Однако было бы ошибкой не оценивать роль микробной контаминации наземных экосистем поскольку, в совокупности, они являются возможным звеном в эпидемиологической цепочке инфекционных заболеваний.

Немаловажным фактором, способствующим распространению инфекций, бактериальной природы могут служить различные земляные работы и строительство, объём которых за последние годы в Якутске стремительно растёт, в связи с переселением жителей отдалённых улусов и мигрирующего населения ближе к столице республики. Осваиваются и застраиваются свободные земельные участки, при этом горизонты почвы, а вместе с ними и микроорганизмы покоящиеся в них, оказываются вскрытыми, выброшенными на поверхность и рассеянными в окружающей среде.

Путём статистической обработки исследований почвогрунтов селитебных зон Якутска за 16 лет установлено, что среди выделенных культур 93% приходится на энтеробактерии. Из них: 49% - Escherichia; 25% - Citrobacter; 11% - Serratia; по 2-3%- Enterobacter, Klebsiella , Proteus [5]. Широкое распространение грамотрицательных бактерий, представляющих группу потенциально патогенных для людей, наблюдалось и в почвах малообжитых районах Якутии и крайнего Севера [6].

В процессе проведения микробиологического мониторинга за наземными экосистемами на аварийных объектах нефтегазового комплекса Якутии, не являющимися местом для постоянного проживания людей и находящимися в удалении от транспортной магистрали также установлен факт распространения энтеробактерий в почвах, воде открытых водоёмов и донных отложениях. Остаточное содержание нефтепродуктов не оказало токсического влияния на данную группу микроорганизмов. Более того, те же пресловутые клебсиеллы, были выделены практически из всех исследованных проб, а часть штаммов обладали способностью активно окислять нефтяные углеводороды.



Таким образом, микробиологические исследования наземных экосистем свидетельствуют о том, что, в природно-климатических условиях Якутии, антропогенно и техногенно изменённая микрофлора активно участвует в эпидемиологических процессах и формирует состояние здоровья населения. Поступающие, в открытые экосистемы потенциально патогенные микроорганизмы вступают в сложные взаимоотношения с макроорганизмами, в результате пассажа могут формировать варианты возбудителей опасных в эпидемиологическом плане.


Литература

  1. Ягодинский В. Н., Рейнару И. Элементы эпидемиологического надзора. – Таллин: Вангус, 1987. - 272с.

  2. Ерофеевская Л.А., Чернявский В.Ф., Антонов Н.А., Литвинова Л.Н. Методологический и методический подходы при микробиологических исследования снежных покровов в северных широтах // Якутский медицинский журнал. ЯНЦ СО РАМН, Якутск, 2007.- Вып.2(18). - С. 39 - 41.

  3. Ерофеевская Л.А., Чернявский В.Ф.Циркуляция микроорганизмов в городской экосистеме // Якутский медицинский журнал. ЯНЦ СО РАМН, 2007.- Вып.2(18). – С. 33 - 37.

  4. Мамонтова Л.М., Кондратьева А.М., Марков А.В., Зуенок Н.В., Анганова Е.В. и др. Принципы организации микробиологического мониторинга // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2001. - №4(18). – С.53 - 55.

  5. Ерофеевская Л.А. Санитарно-экологическая оценка почв экосистемы г. Якутска // Якутский медицинский журнал. ЯНЦ СО РАМН, 2007.-№.2(18). – С. 48 - 51.

  6. Литвин В.Ю. Случайный паразитизм микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 1992. - №1. – С. 52-55.


Изучение влияния пломбировочного материала Радент на некоторые свойства Escherichia coli,

выделенные при периодонтите

И. И. Задорина, Л. А. Мозговая, Л. П. Быкова,

А. П. Годовалов, А. С. Ситникова, Н. Н. Старикова

ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия

им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России, Пермь, Россия AGodovalov@gmail.com, zzzadorina@rambler.ru
Известно, что эндодонтическая инфекция является полимикробной; даже после тщательной биомеханической подготовки корневых каналов зубов в них могут оставаться патогенные микроорганизмы. Одной из причин неудачного лечения осложненных форм кариеса является резистентность некоторых видов микроорганизмов. Так, Enterococcus faecalis и Candida albicans весьма устойчивы к антимикробному действию гидроксида кальция из-за их способности проникать в дентинные трубочки и адаптироваться к меняющимся условиям [1]. Именно поэтому корневой пломбировочный материал должен обладать выраженным антибактериальным эффектом. Исходя из этого, поиск лучшей альтернативы привел к различным сочетаниям гидроксида кальция, например, с хлоргексидином; последний обладает достаточно широким спектром антибактериального действия в отношении аэробных и анаэробных микроорганизмов, а также различных видов Candida.

Цель исследования – изучить влияние разных способов приготовления препарата для пломбирования корневых каналов под все типы постоянных пломбировочных материалов “Радент” на жизнеспособность возбудителей периодонтита.

Материалы и методы. В работе использовали материал для пломбирования корневых каналов под все типы постоянных пломбировочных материалов “Радент” (Радуга Р, Россия), который состоит из окиси цинка (70%) и гидроокиси кальция (30%). В первой серии опытов порошкообразный препарат “Радент” растворяли в дистиллированной воде, а во второй – с использованием 1% раствора хлоргексидина. Для определения противомикробного действия препарата “Радент” использовали методику Lai et al. [2]. Чувствительность микроорганизмов определяли путем прямого нанесения проб материала “Радент” на газонный посев инокулюма тестируемого штамма, который соответствует по плотности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда и содержит примерно 1,5×108 КОЕ/мл. Пломбировочный материал наносился на посев в объеме 40 мкл. Учет результатов производили через 18-24 ч инкубации посевов при температуре +35оС. Результат выражали в миллиметрах диаметра зоны задержки роста тестируемого штамма. Все штаммы были получены при микробиологическом исследовании отделяемого зубных каналов пациентов с периодонтитом. Статистическую обработку данных осуществляли с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение. В ходе проведенных исследований установлено, что препарат “Радент” обладает антибактериальными свойствами. Вокруг препарата формируется четко видимая зона задержки роста всех исследуемых штаммов. При приготовлении препарата “Радент” с использованием хлоргексидина зона задержки роста статистически значимо увеличивается для всех исследуемых штаммов микроорганизмов (табл. 1).


Таблица 1. Влияние препарата “Радент”, приготовленного на дистиллированной воде и хлоргексидине,

на жизнеспособность микроорганизмов


Тестируемые штаммы

Зона задержки роста, мм

p между групп-пами

препарат “Радент” приготов-лен на дистил-лирован-ной воде

Препа-рат “Радент” приго-товлен на хлор-гекси-дине

Escherichia coli

9,8±0,7

17,8±1,5

<0,05

Citrobacter sp.

8,5±0,5

15,7±0,3

<0,05

Streptococcus Viridans

8,0±1,0

12,0±0,4

<0,05

Streptococcus pyogenes

10,2±1,3

12,1±1,2

>0,05

Staphylococcus aureus

9,0±0,4

18,2±0,9

<0,05

Candida albicans

8,1±0,4

15,8±1,1

<0,05

Staphylococcus hyicus

9,0±2,0

19,0±2,0

>0,05

Staphylococcus epidermidis

11,0±0,7

20,4±1,4

<0,05

Staphulococcus saprophyticus

11,3±0,5

19,6±1,4

<0,05

Staphylococcus haemolyticus

10,7±0,8

20,4±1,4

<0,05

Enterococcus sp.

9,5±1,5

15,0±1,0

>0,05

Механизм антибактериального действия пломбировочной пасты связан с наличием в её составе гидроксильного радикала, который вызывает перекисное окисление липидов клеточной стенки мембраны. Использование и гидроксид-содержащего препарата, и хлоргексидина приводит к формированию аддитивного или синергистического эффекта [3].

Таким образом, проведенные исследования показали, что от типа транспортного средства, на котором готовили гидроксид-содержащий препарат “Радент” в качестве внутриканального лекарственного средства, зависит его антимикробная активность; последняя может быть усилена за счет использования раствора хлоргексидина.



Литература

1. Queiroz A.M., Nelson-Filho P., Silva L.A., Assed S., Silva R.A., Ito I.Y. Antibacterial activity of root canal filling materials for primary teeth: zinc oxide and eugenol cement, Calen paste thickened with zinc oxide, Sealapex and EndoREZ // Braz. Dent. J. – 2009. – Vol. 20(4). – P. 290-296.

2. Lai C.C., Huang F.M., Yang H.W., Chan Y., Huang M.S., Chou M.Y., Chang Y.C. Antimicrobial activity of four root canal sealers against endodontic pathogens // Clin. Oral. Investig. – 2001. – Vol. 5(4). – P. 236-239.

3. Vaghela D.J., Kandaswamy D., Venkateshbabu N., Jamini N., Ganesh A. Disinfection of dentinal tubules with two different formulations of calcium hydroxide as compared to 2% chlorhexidine: As intracanal medicaments against Enterococcus faecalis and Candida albicans: An in vitro study // J. Conserv. Dent. – 2011. – Vol. 14(2). – P. 182-186.



СРАВНЕНИЕ СОСТАВА КЛЕТОК МИКОБАКТЕРИЙ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS HR37v И MYCOBACTERIUM SMEGMATIS mc2155, НАХОДЯЩИХСЯ В АКТИВНОМ И НЕКУЛЬТИВИРУЕМОМ СОСТОЯНИЯХ

Н. С. Морозова1, А. С. Ильина1, М. О. Шлеева2,

Г. М. Сорокоумова1, А. А. Селищева1,

А. С. Капрельянц2, В. И. Швец1

1 Московский государственный университет тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова,

г. Москва, Россия, morozova_natalia@mail.ru

2 Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН,

г. Москва, Россия

Известно, что одна треть населения планеты является носителем латентной формы туберкулёза [1], при которой не наблюдается проявления клинических признаков заболевания. Такая форма заболевания связана с важной особенностью микобактерий переходить в дормантное (покоящееся или некультивируемое (НК)) состояние [2]. Исследование особенностей строения клеточной стенки микобактерий является ключевым при разработке новых подходов лечения не только туберкулёза, но и других микобактериальных заболеваний в связи с растущим количеством рецидивных и плохо поддающихся лечению случаев заболевания.

Из-за сложности изучения in vivo влияния воздействий организма-хозяина и ответной реакции со стороны микобактерий был разработан подход создания моделей дормантности in vitro. Такие модели позволяют изучать механизмы перехода в некультивируемое состояние и механизмы реактивации; также была доказана целесообразность использования в качестве моделей близкородственных Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis) быстрорастущих непатогенных микобактерий, например, таких как Mycobacterium smegmatis (M.smegmatis).

Для сравнения клеточного состава микобактерий нами были использованы две модели перехода из активно-делящегося в некультивируемое состояние. Одна модель была разработана на основе штамма M.smegmatis mc2155 [3], другая pH-зависимая модель была получена на основе штамма M.tuberculosis H37Rv [4].

Клетки микобактерий отделяли от внеклеточной среды центрифугированием, белки экстрагировали водным раствором додецилсульфата натрия, липиды – смесью хлороформа и метанола по модифицированному метода Блайя-Дайера.

Рис. 1. Зависимость роста M.smegmatis в среде H-dB (1), содержания липидов (2) и белков (3) клеток, находящихся в активном состоянии, от времени культивирования в расчете на сухую биомассу. Среднеквадратическое отклонение значений КОЕ находится в пределах от 10 до 30%.



Рис. 2. Зависимость роста M.smegmatis в среде mH-deB (1), содержания липидов (2) и белков (3) в клетках при переходе в НК состоянии, от времени культивирования в расчете на сухую биомассу. Среднеквадратическое отклонение значений КОЕ находится в пределах от 10 до 30%.


Сравнение соотношения липид/белок показало, что в метаболически активном состоянии клетки M.smegmatis в стационарной фазе накапливают больше липидов, чем белков (см. Рис.1). Динамика изменения соотношения белок/липид для клеток M.smegmatis, переходящих в НК-состояние показала более сложную картину: вплоть до 50 часа культивирования клеток (падение КОЕ (колониеобразующие единицы) клеток/мл составляло три порядка по сравнению с активно-делящимися клетками) происходило накопление липидов, далее количество липидов уменьшалось таким образом что в экстракте клеток, находящихся в НК-состоянии, преобладали белки (см. Рис.2).

Похожая закономерность была нами обнаружена и при изучении белково-липидного состава клеток M.tuberculosis, находящихся в активном и НК состояниях (см. Рис.3, 4).


Рис. 3. Изменение численности жизнеспособных клеток (КОЕ и НВЧК (наиболее вероятное число клеток) (1, 2 в случае роста НК-клеток и 4 (значение КОЕ = значению НВЧК) в случае роста активных клеток) M.tuberculosis, а также измерение pH среды роста Sauton со стартовым значением pH 8,0 (3) в случае НК-клеток и 8,4 (5) в случае активных клеток от времени культивирования в расчете на сухую биомассу.



Рис. 4. Зависимость содержания липидов (1) и белков (2) в клетках M.tuberculosis, находящихся в НК-состоянии, а также липидов (3) и белков (4) в клетках M.tuberculosis, находящихся в активном состоянии, от времени культивирования в расчете на сухую биомассу.


Для обеих моделей было характерно максимальное содержание липидных компонентов в переходном состоянии с последующим резким снижением количества липидов, совпадающего с падением значения КОЕ. Данные полученные в нашей работе показывают, что процесс перехода клеток из активного в НК-состояние как клеток M.smegmatis,так и M.tuberculosis сопровождается уменьшением количества липидов. Эти результаты отличаются от данных, приведенных ранее в литературе, когда при воздействии стрессовых условий (снижение уровня кислорода, увеличение содержания оксида азота (I) и кислотности среды), приводящих к переходу в нереплицируемое состояние [5], наблюдали накопление триацилглицеринов (ТАГ). Можно предположить, что предложенная нами модель соответствует истинно дормантному (некультивируемому) состоянию микобактерий, которое впоследстивии требует специальной процедуры «оживления» для возврата к активному состоянию, в то время как другие модели представляют собой модели переходного состояния из активно-делящегося в дормантное состояние.
Литература

  1. Dye C. et al. // JAMA (J Am Med Assoc). 1999. V. 282. P. 677 – 686.

  2. Перельман М. И. и др. Фтизиатрия. – М.: Медицина, 2004. – 520 с.

  3. Салина Е. Г. и др. // Микробиология. 2006. Т.75.№4. С.1-7.

  4. Shleeva M. O. et al. // Tuberculosis. 2011. V.91(2). P.146 – 154.

  5. Deb C. et al. // PLoS ONE. 2009. V.4. No.6. P.1 – 15.


Секция 6. Почвоведение
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11


База данных защищена авторским правом ©shkola.of.by 2016
звярнуцца да адміністрацыі

    Галоўная старонка