Инструкция по применению «Люис рпга тест»




Дата канвертавання27.04.2016
Памер106.45 Kb.




ИНСТРУКЦИЯ

по применению «Люис РПГА тест»

Набор реагентов

для определения антител к Treponema pallidum в сыворотке крови

человека при диагностике сифилиса.

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Люис РПГА тест», далее по тексту – Набор, предназначен для применения в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений при обследовании с целью диагностики сифилиса.


2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Принцип действия


При взаимодействии специфических антител, находящихся в сыворотке (или плазме) крови человека, с диагностикумом, содержащим антигены Treponema pallidum, происходит агглютинация эритроцитов диагностикума.

2.2. Состав набора

Ингредиент

Количество

Описание

Диагностикум

8,5 мл (один флакон)

Суспензия формалинизированных эритроцитов цыпленка, сенсибилизированных антигеном Treponema pallidum. Суспензия







красно-коричневого цвета, при хранении разделяется на 2 фракции: верхнюю – прозрачную светло-желтую жидкость, нижнюю – темно-бурый осадок эритроцитов. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1%.

Контрольные эритроциты

8,5 мл (один флакон)

Формалинизированные эритроциты цыпленка, не сенсибилизированные антигеном Treponema pallidum. Суспензия красно-коричневого цвета, при хранении разделяется на 2 фракции: верхнюю – прозрачную светло-желтую жидкость, нижнюю – темно-бурый осадок эритроцитов. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1 %.

Положительный контрольный образец (К+)

0,5 мл (один флакон)

Сыворотка (или плазма) крови человека с клинически и серологически подтвержденным диагнозом сифилиса, содержащая антитела к антигенам Treponema pallidum, не содержащая антител к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, а также HBsAg. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1 %. В РПГА с диагностикумом демонстрирует наличие антител в титре не менее 1:1280. Прозрачная жидкость желтоватого цвета.

Отрицательный контрольный образец (К-)

0,5 мл (один флакон)

Сыворотка (или плазма) здорового человека, не содержащая антител к антигенам Treponema pallidum, ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, а также HBsAg. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1 %. В РПГА с диагностикумом показывает отсутствие антител к антигенам Treponema pallidum. Прозрачная жидкость желтоватого цвета.

Буфер для разведения

20 мл (один флакон)

Прозрачная жидкость желто-оранжевого цвета в стеклянном флаконе объемом 20 мл. Содержит консервант – азид натрия в концентрации 0,1%.

Планшет для микротитрования

2 шт

Планшет гемагглютинационный неразборный с U-образными лунками, в полиэтиленовом пакете с замком.

Набор рассчитан на проведение 100 определений.

3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ


● При работе с образцами сывороток (или плазмой) крови пациентов следует обращаться как с потенциально инфекционными объектами, соблюдая меры предосторожности (СП 3.3.2.1288-03).

● Не разрешается модифицировать процедуру проведения анализа, сокращать продолжительность времени постановки реакции, использовать реагенты других производителей, а также реагенты других серий Набора «Люис РПГА тест» .

● Необходимо предусмотреть меры по предотвращению перекрёстной контаминации реагентов.

● Компоненты «Люис РПГА тест» содержат 0,1% азида натрия в качестве консерванта, который может быть токсичен при попадании внутрь.



4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АНАЛИЗА

1. Дозаторы механические со сменными наконечниками, с диапазоном дозирования жидкости 10-100 мкл, 100-1000 мкл;

2. Таймер;

3. Холодильник;

4. Перчатки латексные.
5. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Для исследования используют сыворотку (или плазму) крови человека.

Для получения сыворотки свежевзятую кровь, полученную от пациента, инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 30-60 мин, выдерживают при температуре 4 °С в течение 1,5 ч, после чего центрифугируют в течение 10 мин при 1,5 тыс. об/мин. Не используют образцы со следами бактериального пророста, гемолизированные или хилёзные.

Допускается хранение сывороток при температуре от 2 до 8 °С в течение 5 дней или при минус 20 °С, не более 6 недель.


6. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

6.1. Подготовка реагентов

Все реагенты и образцы до начала исследования выдерживают в течение 30 мин при температуре от 18 до 25 °С.



Перед употреблением диагностикум и контрольные эритроциты (флакон 1 и флакон 2) встряхивают до образования гомогенной суспензии. Не допускается подсыхание диагностикума и контрольных эритроцитов на стенках флаконов в процессе хранения набора.

Для постановки реакции применяют планшеты для микротитрования с U-образными лунками.



Примечание: Реакцию проводят на строго горизонтальной поверхности, не допуская близости приборов, создающих вибрацию.
6.2. Проведение анализа

ВНИМАНИЕ: реакцию с К+ и К- ставят так же, как и с испытуемым образцом сыворотки крови.


Качественный метод

  1. Разведения испытуемой сыворотки готовят непосредственно в лунках планшета для микротитрования, для этого в лунки вносят буфер для разведения (флакон 5) по следующей схеме:

Ряд 1 (вертикальный) 25 мкл

Ряд 2 (вертикальный) 100 мкл

Ряды 3 и 4 (вертикальные) 25 мкл

Вносят 25 мкл тестируемой сыворотки в лунку ряда 1 (получают разведение сыворотки 1:2). Перемешивают содержимое лунки ряда 1 и переносят 25 мкл в лунку ряда 2 (получают разведение сыворот-ки 1:10). Перемешивают содержимое лунки ряда 2 и переносят по 25 мкл в лунку ряда 3 и в лунку ряда 4, перемешивают и удаляют по 25 мкл; лунки рядов 3 и 4, содержащие по 25 мкл разведения 1:20 тестируемой сыворотки, используют для постановки реакции.

Разведение сыворотки 1:20 можно приготовить в лунке ряда 1. Для этого к 190 мкл буфера для разведения (флакон 5) добавляют 10 мкл сыворотки, перемешивают, после чего из этой лунки отбирают по 25 мкл и переносят в лунки рядов 2 и 3. В этом случае для постановки реакции используют лунки 2 и 3 рядов, содержащие по 25 мкл разведения тестируемой сыворотки 1:20.

Разведение исходных сывороток 1:20 допускается делать в микро-

пробирках, например, добавить 10 мкл сыворотки к 190 мкл буфера для разведения (флакон 5) и перемешать. Для постановки реакции в две лунки планшета для микротитрования вносят по 25 мкл приготовленного разведения испытуемой сыворотки.


  1. Добавляют по 75 мкл суспензии диагностикума (флакон 1) в лунки 4-го ряда и по 75 мкл суспензии контрольных эритроцитов (флакон 2) в лунки 3-го ряда. Конечное разведение тестируемой сыворотки составляет 1:80. Необходимо поддерживать сохранение однородности суспензий во флаконах, из которых производится раскапывание. При образовании осадка или намечающемся расслаивании тщательно перемешивают содержимое флакона.

  2. В каждую постановку обязательно включают положительный контроль (К+) (флакон 3) и отрицательный контроль (К-) (флакон 4), входящие в состав набора. Реакцию с контрольными образцами ставят аналогично.

  3. После раскапывания реагентов осторожно покачивают планшет (в течение 1 мин) вручную, чтобы перемешать содержимое лунок. Закрывают планшет и инкубируют его 45-60 мин при комнатной температуре. До учета результатов планшет должен быть неподвижным! Планшет можно оставить на ночь.

  4. Учитывают результаты агглютинации.

Количественный метод


После определения антител в образце сыворотки (или плазме) крови качественным методом на следующем этапе может быть проведен количественный анализ положительных образцов. Начальное разведение сыворотки для количественного определения - 1:80.

Схема постановки реакции следующая:



  1. Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 5) в лунки вертикальных рядов 1-8 (количество горизонтальных рядов должно соответствовать количеству образцов) планшета для количественного анализа.

  2. Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 5) в лунки вертикальных рядов 1-8 для титрования положительного контроля (К+) (флакон 3).

  3. Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 3) в две лунки планшета для постановки реакции с отрицательным контролем (К-) (флакон 4).

  4. Вносят по 25 мкл образца из соответствующей лунки ряда 2 (разведение сыворотки 1:10) планшета, который был использован для постановки качественного метода, в лунку вертикального ряда 1 и 2 планшета, используемого для количественного метода, перемешивают содержимое лунок. Из лунки 1 удаляют 25 мкл.

  5. Из лунки вертикального ряда 2 после перемешивания содержимого переносят 25 мкл в лунку 3. Готовят последовательные двукратные разведения образца в лунках рядов 3-8 (разведение образцов сыворотки от 1:20 до 1:1280). Из последней лунки (ряд 8) отбирают избыточные 25 мкл и удаляют.

  6. Для постановки реакции с отрицательным контролем, в две лунки, содержащие по 25 мкл буфера для разведения (см. п. 1), добавляют по 25 мкл разведения К- 1:10, перемешивают и удаляют по 25 мкл.

  7. Вносят по 75 мкл контрольных эритроцитов (флакон 2) в лунки вертикального ряда 1 и в одну из лунок с К- (конечное разведение исследуемой сыворотки – 1:80).

  8. Вносят по 75 мкл диагностикума (флакон 1) в лунки рядов 2-8, а также во вторую лунку с отрицательным контролем. Конечные разведения исследуемых образцов сыворотки (или плазмы) крови и К+ от 1:80 до 1:5120.

  9. Перемешивают содержимое лунок планшета осторожным покачиванием в течение 1 мин вручную. Закрывают крышкой и оставляют на 45-60 мин при температуре от 18 до 25 °С. До учета результатов планшет должен быть неподвижным! Планшет можно оставить на ночь.

  10. Учитывают результаты реакции.
7. РЕГИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

7.1. Общие сведения при учете результатов:

Учет результатов производят визуально по следующей шкале:

4+ - ровный слой агглютинированных эритроцитов по всей поверхности дна лунки («зонтик»), иногда со складчатым краем;

3+ - то же, что и 4+, но с намечающимся кольцом по периферии «зонтика»;

2+ - эритроциты образуют широкое кольцо с выраженным просветом в центре;

1+ - эритроциты образуют более плотное кольцо меньшего размера с небольшим просветом в центре;



  • - компактный осадок эритроцитов со слабо заметным просветом в центре;

- - компактный осадок эритроцитов в центре лунки («пуговка»).

Примечание:

1) Следует обращать внимание на возможный нестандартный вид реакции. Загнутые или неровные края «зонтика» могут быть результатом избытка антител (эффект «прозоны»).

2) В лунках с положительным и отрицательным контролем, а также в лунках с тестируемыми образцами, при добавлении контрольных эритроцитов должно быть отсутствие агглютинации.

3) В лунках с отрицательным контролем и диагностикумом должно быть отсутствие агглютинации.

4) Агглютинация эритроцитов диагностикума при отсутствии агглютинации контрольных эритроцитов свидетельствует о наличии в сыворотке крови специфических антител к Treponema pallidum. Считывание результатов и их интерпретацию производят в сравнении с контролями.

5) Агглютинация контрольных эритроцитов наряду с агглютинацией диагностикума при тестировании пробы свидетельствует о наличии антиэритроцитарных антител. В этом случае тест повторяют. Если при повторной постановке реакции с этой пробой вновь наблюдают агглютинацию не только диагностикума, но и контрольных эритроцитов, то тест проводят после абсорбции испытуемой сыворотки. Для этого к 10 мкл исходной испытуемой сыворотки добавляют 190 мкл контрольных эритроцитов (флакон 2), перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Центрифугируют 3 мин при 2000 об/мин. Супернатант (разведение сыворотки 1:20) используют для постановки реакции с суспензией диагностикума и контрольных эритроцитов по стандартному протоколу (25 мкл супернатанта смешивают с 75 мкл диагностикума и 25 мкл супернатанта – с 75 мкл контрольных эритроцитов).



7.2. Интерпретация результатов при качественном методе:

ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 4+ и 3+;

СЛАБОПОЛОЖИТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 2+;

СОМНИТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 1+;

ОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ считаются образцы, реагирующие на ± и -.

При постановке реакции качественным методом в случае получения слабоположительных и/или сомнительных результатов рекомендуется протестировать образец повторно. При получении аналогичного результата рекомендуется через некоторое время повторное взятие крови и проведение повторного анализа.



Примечание: Все пробы, дающие слабоположительные и сомнительные результаты, рекомендуется дополнительно исследовать другими методами.

7.3. Интерпретация результатов при количественном методе:

При количественном методе постановки реакции титром положительной сыворотки считается максимальное разведение, дающее результат, соответствующий «1+». При количественном методе в положительном контроле (К+) (флакон 3) должны определяться антитела к T. pallidum в титре не ниже 1:1280.


8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в недоступном для детей месте.

ХРАНИТЬ ТОЛЬКО ВЕРТИКАЛЬНО.

Транспортирование в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в условиях, исключающих замораживание. Допускается кратковременное (не более 3 сут.) транспортирование при температуре от 9 до 25 °С.

Срок годности - 18 месяцев. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Условия отпуска. Для диагностики in vitro в лечебно-профилактических и санитарно-противоэпидемических учреждениях.

Рекламации на специфические и физические свойства компонентов набора направлять в адрес предприятия-изготовителя:

ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС» Россия , 125047, г. Москва, ул. 4-я Тверская-Ямская, д. 2/11, строение 2, тел./факс (495) 741-49-89, а также в адрес ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий», 107076, г. Москва, ул. Короленко, д. 3, строение 6, тел. (499) 785-20-15, факс (499) 785-20-16.


К. 7.02.3 В. 270709.



База данных защищена авторским правом ©shkola.of.by 2016
звярнуцца да адміністрацыі

    Галоўная старонка