Proteasas coagulantes de leche obtenidas de flores de dos especies de cardos




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PROTEASAS COAGULANTES DE LECHE OBTENIDAS DE FLORES DE DOS ESPECIES DE CARDOS




S. Vairo Cavalli 1, C. Brutti, C. Natalucci 2, N. Priolo.

LIPROVE, Depto. Cs. Biológicas, Fac. Cs. Exactas, UNLP, CC 711, 1900, La Plata, Argentina. E-mail: svairo@biol.unlp.edu.ar.

Se obtuvieron extractos crudos de flores de Onopordum acanthium L. y Silybum marianum (L.) Gaertn. (Asteraceae-Cardueae) con soluciones buffer de pH 3,0 y pH 7,0. En ambas especies los extractos obtenidos a pH 3,0 mostraron mayor actividad coagulante de leche y menor número de polipéptidos al ser analizados por SDS-PAGE e IEF, por lo que fueron seleccionados para iniciar su purificación. El extracto crudo de O. acanthium mostró mayor actividad coagulante que el de S. marianum. Los espectros UV y visible presentaron máximos de absorbancia a 280, 330 y 535 nm que corresponderían a proteínas y a diferentes compuestos de naturaleza fenólica, los que fueron eliminados por cromatografía de exclusión molecular (Sephadex G-25). Los espectros UV y visible de los extractos parcialmente purificados revelaron en ambos casos la remoción de los compuestos de naturaleza fenólica.

Las muestras parcialmente purificadas presentaron mayor actividad proteolítica a pH ácido con Hb como sustrato (pH óptimo 2,0 y 3,8 para O. acanthium y S. marianum, respectivamente). La actividad coagulante de leche fue inhibida totalmente por pepstatina A, inhibidor específico de proteinasas aspárticas. Las preparaciones enzimáticas parcialmente purificadas de O. acanthium y S. marianum analizadas por IEF y zimograma presentaron, en cada caso, una banda activa con valores de pI ácidos (5,0 y 4,5, respectivamente).

Los resultados obtenidos en las dos especies estudiadas demuestran la presencia de proteasas aspárticas con capacidad coagulante de leche, tal como se ha observado en otras especies pertenecientes a la misma tribu.


1CONICET, 2CICPBA


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